Žmogaus krūties navikų ląstelių pirminių kultūrų išsiskyrimas ir apibūdinimas

46 psl. / 10658 žod.

Ištrauka

Krūties vėžys – labai heterogeniška liga: navikai skiriasi savo morfologiniais ir citologiniais požymiais, genų raiška vėžinėse ląstelėse bei naviko vystymuisi svarbių ląstelės paviršiaus molekulių raiška. Nepaisant to, dažniausiai šios ligos gydymui parenkami tradiciniai vėžio terapijos metodai: operacija, radioterapija, chemoterapija ir/arba hormonų terapija [1, 2]. Šie gydymo metodai nėra pakankamai specifiniai, todėl jie yra kenksmingi ir sveikoms organizmo ląstelėms, kas sukelia įvairius nepageidaujamus poveikius. Tai skatina gydytojus ir mokslininkus ieškoti labiau personalizuoto krūties vėžio gydymo alternatyvų, tokių kaip FAB raiškos panaudojimas vaistų aktyvavimui [3] ar koneksinų ir plyšinių jungčių (PJ) funkcijų panaudojimas naikinant vėžines ląsteles [4].

Pirminės krūties vėžinių ląstelių kultūros yra geras ligos in vitro modelis, galintis suteikti reikšmingos informacijos apie naviko savybes. Iš nedidelio biopsijos ar operacijos metu gauto audinio gabalėlio galima išskirti ląsteles, kurios beveik neribotai dauginasi. Ląstelės gali būti naudojamos kaip tyrimo objektas siekiant nustatyti įvairių krūties vėžio tipų atsaką į skirtingus gydymo metodus, gerinant supratimą apie vėžinėse ląstelėse įvykusius pakitimus. Tokios kultūros turi pranašumų, lyginant jas su tradiciškai naudojamomis ląstelių linijomis: eksperimentams dažniausiai naudojamos ląstelių linijos, išskirtos iš piktybiškesnių, dažniausiai metastazuojančių auglių, todėl jos neatspindi navikų heterogeniškumo [5]. Nustatyta, kad dažnai tyrimams naudojamų ląstelių linijų, tokių kaip MDA-MB-231 ir MCF-7, genotipas tarp laboratorijų skiriasi [6, 7]. Tai gali lemti svarbius ląstelių fenotipo pokyčius ir sukelti sunkumų interpretuojant gautus tyrimų rezultatus. Pirminės krūties vėžinių ląstelių kultūros, kita vertus, tiriamos atlikus tik keletą persėjimų, todėl šios ląstelės labiau atitinka auglio savybes ir gali būti panaudotos kaip ligos modelis. Šios ląstelių kultūros turi ir trūkumų: išgauti pakankamai homogenišką kultūrą yra sunku, o išskirtos ląstelės dažniausiai lėtai dalijasi [5].

Nors pirminės krūties vėžinių ląstelių kultūros gali būti naudingos siekiant nuspėti atsaką į chemoterapiją, duomenų apie šių ląstelių fenotipą yra mažai. Dažniausiai tiriama auglio ląstelių CD24 ir CD44 žymenų raiška [8], tačiau kitų ligos vystymuisi reikšmingų žymenų tyrimų atlikta nedaug. Mūsų darbo tikslas – ištirti ir palyginti iš krūties vėžio operacinės ar biopsijos medžiagos išskirtas pirmines ląstelių kultūras, įvertinti jų morfologiją, proliferaciją ir ląstelės žymenų (CD24, CD44, FAB, Ki-67, Cx26, Cx30, Cx43 ir Cx45) raišką.

Darbo tikslas: Ištirti ir palyginti iš krūties naviko išskirtas pirmines ląstelių kultūras, įvertinti jų morfologiją, proliferaciją ir ląstelės žymenų raišką.  

Darbo uždaviniai:  

1 Iš krūties navikų operacijos ar biopsijos metu gautos medžiagos išskirti pirmines krūties vėžio ląstelių kultūras ir aprašyti ląstelių morfologiją.

2 Įvertinti ir palyginti išskirtų ląstelių (BC) bei žmogaus krūties duktalinės karcinomos (MCF-7) ir adenokarcinomos (MDA-MB-231) linijų ląstelių proliferaciją.

3 Įvertinti CD24 ir CD44 žymenų raišką pirminėse krūties vėžio ląstelių kultūrose.

4 Ištirti bei kiekybiškai įvertinti proliferacijos žymens Ki-67 raišką pirminėse krūties vėžio ląstelių kultūrose.

5 Ištirti bei kiekybiškai įvertinti fibroblastų aktyvavimo baltymo (FAB) raišką pirminėse krūties vėžio ląstelių kultūrose.

6 Ištirti koneksinų (Cx26, Cx30, Cx43 bei Cx45) raišką pirminėse krūties vėžio ląstelių kultūrose bei MDA-MB-231 ląstelių linijoje.   


Turinys

  • SANTRAUKA5
  • SUMMARY6
  • ETIKOS KOMITETO LEIDIMAS7
  • 1 SANTRUMPOS IR SUTARTINIAI ŽENKLAI8
  • 2 ĮVADAS9
  • 3 DARBO TIKSLAS IR UŽDAVINIAI10
  • 4 LITERATŪROS APŽVALGA10
  • 4.1 Krūties vėžio klasifikacija10
  • 4.2 Vėžinių ląstelių išskyrimas11
  • 4.3 Vėžinių ląstelių žymenys CD24 ir CD4413
  • 4.4 Ląstelių proliferacijos žymuo Ki-6714
  • 4.5 Koneksinai Cx26, Cx30, Cx43 ir Cx4514
  • 4.6 Fibroblastų aktyvavimo baltymas15
  • 5 TYRIMO METODIKA16
  • 5.1 Tyrimo objektas16
  • 5.2 Ląstelių išskyrimas17
  • 5.3 Ląstelių auginimas 185.4
  • Ląstelių proliferacijos tyrimas Hoechst 33342 metodu18
  • 5.5 Ląstelių proliferacijos tyrimas Tripano mėlio testu18
  • 5.6 Ląstelių saugojimas jas šaldant19
  • 5.7 Imunocitochemija19
  • 5.8 Fluorescencinės mikroskopijos analizė20
  • 5.9 Duomenų analizės metodai20
  • 6 REZULTATAI IR JŲ APTARIMAS20
  • 6.1 Išskirtos krūties vėžinių ląstelių kultūros20
  • 6.2 Ląstelių proliferacijos tyrimas22
  • 6.3 Imunocitocheminis CD24 žymens tyrimas24
  • 6.4 Imunocitocheminis CD44 žymens tyrimas25
  • 6.5 Imunocitocheminis Ki-67 tyrimas27
  • 6.6 Imunocitocheminis koneksinų (Cx26, Cx30, Cx43, Cx45) tyrimas29
  • 6.7 Imunocitocheminis fibroblastų aktyvavimo baltymo tyrimas31
  • 7 IŠVADOS34
  • 8 LITERATŪROS SĄRAŠAS35
  • PRIEDAI44
  • 1 Ląstelių šviesinės mikroskopijos nuotraukos44
  • 2 Ląstelių proliferacijos vertinimas tripano mėlio testu45
  • 3 Hoechst 33342 kalibracinė kreivė46

Reziumė

Autorius
sanna
Tipas
Diplominis darbas
Dalykas
Biologija
Kaina
€11.19
Lygis
Universitetas
Įkeltas
Gru 16, 2019
Publikuotas
2016 m.
Apimtis
46 psl.

Susiję darbai

Ląstelinė sandara

Biologija Konspektas 2009 m. velvet
Įvadas į ląstelės biologiją. Geras konspektas su uždaviniais, lentelėmis

Jutimo organų reikšmė žmogaus gyvenime

Biologija Referatas gytukac
Žmogaus akys yra kaukolės akiduobėse. Akį nuo dulkių saugo blakstienos, antakiai, vokai. Ašarų liauka drėkina akies obuolio paviršių, šildo akis, išplauna į akį...

Žmogaus gimimas

Biologija Referatas etysar
Vienas labiausiai šiandieną stulbinančių dalykų yra tai, jog mes gyvename pasaulyje, kuriame žmonės gerokai daugiau žino apie automobilių sandarą bei kompiuterių darbą, negu...

Eukariotų ir prokariotų ląstelių ypatumai

Biologija Referatas julijap
Visos šiuo metu Žemėje gyvenančios gyvų organizmų rūšys skirstomos į penkias pagrindines karalijas moneras (bakterijas ir archėjas), pirmuonis, grybus, augalus ir gyvūnus. Skirstymas...

Ląstelinis transportas

Biologija Referatas 2017 m. Terminatorius
Plazminė membrana, dar vadinama plazmolema, – tai organizmų ląstelių darinys, reguliuojantis molekulių ir jonų pernašą į ląstelės vidų ir iš jos. Ji sudaryta...